LIFEINT · EXOSOME ENCYCLOPEDIA

外泌体荧光标记与摄取示踪

Fluorescent Labeling & Uptake Tracking

🎯 下游验证与机制 板块|演示环境 · 内容持续校订中

一句话总结：让囊泡「看得见」：PKH26/PKH67 膜染、抗体标记、多肽标记三条路线 + 共聚焦摄取动力学。

原理

脂溶性染料（PKH26 红/PKH67 绿）嵌入膜双层实现通用标记；荧光抗体针对表面蛋白；膜感应肽类多肽实现温和特异标记。标记后的囊泡与受体细胞共孵育，共聚焦时程拍摄量化摄取动力学。

材料与试剂

  • PKH26（固与 GY22126）/ PKH67（宇玫博 UR52303）
  • 荧光抗体（CD9/CD63/CD81 流式抗体）
  • 激光共聚焦显微镜
  • 超离设备（洗涤去除游离染料）

详细步骤（可照做）

共 5 步 · 参数以标准样本量为准，请按实际情况等比调整

  1. 1

    染料法：30 μL 囊泡 + 指定稀释液，加入染料涡旋 1 min，室温避光 10 min。

  2. 2

    加 1 mL PBS 终止，100,000×g 离心 70 min 沉降囊泡去除游离染料；重复洗涤一次消除染料聚合假阳性。

  3. 3

    50 μL PBS 重悬，冰上避光暂存。

  4. 4

    摄取实验：标记囊泡与受体细胞按设定比例共孵育 0.5/2/6/24 h。

  5. 5

    共聚焦时程拍摄；流式定量摄取阳性率；设 dye-only 对照排除假阳性。

关键参数速查

常用染料PKH26（红）/ PKH67（绿）
关键对照dye-only（无囊泡）对照必不可少
洗涤两次超离去除游离染料
读出方式共聚焦定位 + 流式定量

⚠️ 常见坑与避坑指南

  • 游离染料形成的胶束是摄取实验最大假阳性来源——洗涤和对照一个都不能省
  • PKH 类染料影响囊泡尺寸分布，标记后建议复测 NTA
  • 长时间曝光注意光漂白，封片用抗淬灭介质

💰 不想自己做？交给生命互联

本项目服务：荧光标记（染料法）+ 共聚焦摄取含税参考价：200+500 元/样周期：3–7 个工作日
在线报价核算 →返回百科目录

本词条为科研知识分享，方法描述基于公开文献与行业通行实践整理，具体实验参数需结合您的样本类型与仪器条件预实验验证。 展示内容可能存在滞后或疏漏，正式立项前请与生命互联技术团队确认。