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碘克沙醇密度梯度超离

Iodixanol Density Gradient (OptiPrep)

🧪 样本处理与分离 板块|演示环境 · 内容持续校订中

一句话总结：分离纯度的金标准。5–40% 四层梯度离心后，外泌体精准富集于 1.13–1.19 g/mL 流分。

原理

碘克沙醇（OptiPrep）形成连续密度环境，不同颗粒按各自浮力密度停留在对应层位。外泌体（1.13–1.19 g/mL）与蛋白聚集体、脂蛋白、病毒等杂质被清晰分层，是 MISEV 指南推荐的高纯度方案。

材料与试剂

  • 碘克沙醇（Sigma D1556）
  • 超速离心机与水平转子
  • 预冷无颗粒 PBS
  • 长针头移液器或穿刺收集管

详细步骤（可照做）

共 9 步 · 参数以标准样本量为准，请按实际情况等比调整

  1. 1

    样本依次 2,000×g 20 min → 3,000×g 30 min → 10,000×g 60 min 预澄清。

  2. 2

    上清 100,000×g 超离 70 min 得粗提外泌体，1 mL PBS 重悬。

  3. 3

    配制 40%、20%、10%、5% 四档碘克沙醇工作液。

  4. 4

    超离管中由底向上按 40%→20%→10%→5% 各铺 3.6 mL，界面保持清晰。

  5. 5

    将 1 mL 囊泡重悬液平铺于梯度顶层。

  6. 6

    严格配平后 4 ℃、100,000×g 超速离心 120 min。

  7. 7

    自上而下等体积收取 12 个流分；目标流分为第 6–9 层（1.13–1.19 g/mL）。

  8. 8

    合并目标流分，大量 PBS 稀释后再次 100,000×g 离心 120 min 去除碘克沙醇。

  9. 9

    200 μL 无颗粒 PBS 重悬终产物。

关键参数速查

梯度设置5/10/20/40%，每层 3.6 mL
目标流分第 6–9 层（1.13–1.19 g/mL）
总时长两次超离各 120 min
适用场景表征批次、测序批次、申报样品

⚠️ 常见坑与避坑指南

  • 铺梯度时沿管壁缓流是成败关键，任何气泡都会打乱梯度
  • 流分收取建议逐层做 NTA 确认，不要只凭经验取层
  • 碘克沙醇残留会干扰下游细胞实验，洗涤离心必须充分

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