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植物组织酶解与上清制备
Plant Tissue Enzymatic Digestion
🧪 样本处理与分离 板块|演示环境 · 内容持续校订中
一句话总结：植物外泌体研究的第一步：纤维素酶+果胶酶破解细胞壁释放囊泡，三级过滤获得澄清上清。
原理
植物细胞壁的主要成分是纤维素与果胶。酶解体系（4% 纤维素酶 + 2% 果胶酶 + 0.6 mol/L 甘露醇渗透压保护，pH 5.8）温和瓦解细胞壁释放胞外囊泡；随后逐级过滤去除细胞器碎片——叶绿体污染是植物 EV 样品的大敌。
材料与试剂
- 纤维素酶（源叶 S10041）
- 果胶酶（源叶 S10007）
- D-甘露醇（生工 A600335）
- 200 目尼龙滤袋
- 1.5 μm / 0.8 μm MCE 滤膜、0.45 μm PVDF 滤膜
详细步骤（可照做）
共 7 步 · 参数以标准样本量为准，请按实际情况等比调整
- 1
称取植物组织记录重量，超纯水反复漂洗去泥土，无菌滤纸吸干。
- 2
无菌切碎碾碎，最大化接触面积。
- 3
按料液比 1:1（w/v）加入酶解液（4% 纤维素酶 + 2% 果胶酶 + 0.6 M 甘露醇，pH 5.8）。
- 4
50 ℃ 恒温振荡避光酶解 6 h。
- 5
浆液倒入 200 目尼龙滤袋挤压过滤，收集粗滤液。
- 6
级联澄清过滤：1.5 μm MCE → 0.8 μm MCE → 0.45 μm PVDF。
- 7
收集终滤液，分装 −80 ℃ 保存。
关键参数速查
| 酶解体系 | 4% 纤维素酶 + 2% 果胶酶 + 0.6 M 甘露醇 |
| pH | 5.8（贴近植物细胞间质环境） |
| 温度时间 | 50 ℃ × 6 h 避光 |
| 组织量 | ≤3 g/样（服务口径） |
⚠️ 常见坑与避坑指南
- 叶绿体碎片是植物 EV 的主要污染物——三级过滤不可省略，后续 WB 应验证 RuBisCO 阴性
- 不同植物组织坚韧度差异大：木质化组织需延长酶解或加大酶量
- 50 ℃ 是多数酶的最适温度上限，热敏活性物质多的植物可降至 37℃ 并延长时间
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本项目服务：组织酶解（植物）含税参考价：200 元/样周期：3 个工作日
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