LIFEINT · EXOSOME ENCYCLOPEDIA

外泌体核酸提取与质控

EV RNA Extraction & QC

🧬 组学分析 板块|演示环境 · 内容持续校订中

一句话总结：柱式法提取微量囊泡 RNA，荧光定量 + 毛细管电泳双重质控，为测序做好准备。

原理

外泌体 RNA 丰度极低且以小 RNA 为主（无清晰 18S/28S 峰属正常现象）。Trizol-LS/柱式联用最大化回收，荧光染料法定量（比紫外法灵敏百倍），毛细管电泳确认片段分布——为建库投入量决策提供依据。

材料与试剂

  • miRNeasy Mini Kit（Qiagen 217004）
  • 氯仿 / 无水乙醇
  • Quantus Fluorometer（Promega）+ RNA 荧光染料
  • Qsep100 毛细管电泳（Bioptic NR1 卡夹）

详细步骤（可照做）

共 7 步 · 参数以标准样本量为准，请按实际情况等比调整

  1. 1

    裂解液室温平衡 5 min；加 140 μL 氯仿涡旋 15 s，室温 3 min。

  2. 2

    4 ℃、12,000×g 离心 15 min 分相，取上层水相。

  3. 3

    加 1.5 倍体积无水乙醇混匀，过 RNeasy 吸附柱（8,000×g 15 s）。

  4. 4

    700 μL RWT 洗涤 → 500 μL RPE 洗涤 ×2 → 空转干燥 1 min。

  5. 5

    30 μL RNase-free water 洗脱 RNA。

  6. 6

    荧光染料定量：1 μL RNA + 染料工作液避光 5 min，Quantus 读浓度（ng/μL）。

  7. 7

    Qsep100 毛细管电泳：NR1 卡夹上样，输出片段分布图谱评估完整性。

关键参数速查

常规产出外泌体 RNA 约 0.5–2 ng/μL 属正常水平
质控要点小 RNA 富集、无明显核糖体峰是好信号
送样建议测序推荐 10 ng，最低 1 ng
保存−80 ℃，避免反复冻融

⚠️ 常见坑与避坑指南

  • 紫外 NanoDrop 对低浓度 RNA 严重失准——务必用荧光法
  • 外泌体 RNA 没有 28S/18S 双峰不是降解！勿用细胞 RNA 标准误判

💰 不想自己做？交给生命互联

本项目服务：核酸提取（RNA）+ 质控含税参考价：150+50 元/样周期：2 个工作日
在线报价核算 →返回百科目录

本词条为科研知识分享，方法描述基于公开文献与行业通行实践整理，具体实验参数需结合您的样本类型与仪器条件预实验验证。 展示内容可能存在滞后或疏漏，正式立项前请与生命互联技术团队确认。