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安全性质控三件套（微生物/支原体/内毒素）
Sterility, Mycoplasma & Endotoxin QC
🔬 表征鉴定 板块|演示环境 · 内容持续校订中
一句话总结：细胞与动物实验前的安全门禁：摇菌培养 + qPCR + 鲎试剂，三项全阴方可进入体内实验。
原理
外泌体制剂若混入细菌、支原体或内毒素，会彻底扭曲下游功能实验结论（免疫激活假象）。三项质控分别覆盖活菌（LB 培养 72 h）、支原体核酸（qPCR 熔解曲线）与革兰氏阴性菌 LPS（鲎试剂凝胶法）。
材料与试剂
- LB 培养基
- 支原体 qPCR 引物组（F: ACTCCTACGGGAGGCAGCAGTA / R: TGCACCATCTGTCACTCTGTTAACCTC）
- 鲎试剂盒（鲎生科 G010500，灵敏度 0.5 EU/mL）
- CFX96 qPCR 仪
详细步骤（可照做）
共 3 步 · 参数以标准样本量为准，请按实际情况等比调整
- 1
微生物：10 μL 样本接入 5 mL LB，37 ℃ 200 rpm 振荡培养 72 h，肉眼观察澄清度（设培养基空白对照）。
- 2
支原体：样本 95 ℃ 10 min 释放核酸；20 μL 体系（10 μL SYBR Mix + 2 μL 引物 + 8 μL 模板）95℃10min→40 循环→熔解曲线；Cq<35 且单峰判阳性。
- 3
内毒素：BET 水稀释样本，与鲎试剂 1:1 混合 37 ℃ 孵育 60 min，倒管判读（凝胶不落=阳性）；阴阳对照必须同时成立结果才有效。
关键参数速查
| 培养周期 | 72 h |
| 支原体判读 | Cq ≥35 为阴性；熔解曲线需单峰 |
| 内毒素限值 | 细胞实验 <0.5 EU/mL；动物给药要求更低 |
| 送检时机 | 每次制备批次放行前 |
⚠️ 常见坑与避坑指南
- 鲎试验极易假阳性——耗材必须无内毒素，操作区避免灰尘
- 支原体 qPCR 必须带阳性对照，否则 N/A 结果无法解释
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