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蔗糖垫超离
Sucrose Cushion Ultracentrifugation
🧪 样本处理与分离 板块|演示环境 · 内容持续校订中
一句话总结：在超离基础上增加 30% 蔗糖密度垫层，进一步去除蛋白杂质、提升纯度。
原理
外泌体浮力密度约 1.13–1.19 g/mL。以重水（D₂O）配制的 30% 蔗糖垫提供密度屏障：杂蛋白因密度小于蔗糖无法穿过垫层，而外泌体离心后富集于垫层内，实现二次纯化。
材料与试剂
- 超速离心机与转子
- 蔗糖（分析纯）
- 重水 D₂O
- 预冷无颗粒 PBS
详细步骤（可照做）
共 8 步 · 参数以标准样本量为准，请按实际情况等比调整
- 1
按标准差速流程获得初提外泌体（2,000×g 30 min → 10,000×g 45 min → 0.45 μm 过滤 → 100,000×g 90 min）。
- 2
PBS 重悬后再 100,000×g 离心 90 min 充分洗涤，得初提囊泡。
- 3
新超离管底部预先加入 250 μL 30%（w/v）蔗糖垫（D₂O 配制）。
- 4
将 1 mL 初提囊泡沿管壁极缓滴加于蔗糖垫上方，保持界面清晰。
- 5
4 ℃、100,000×g 超速离心 90 min——外泌体因密度截留富集于垫层。
- 6
吸头伸入管底缓慢吸取底部 250 μL 蔗糖组分，转移至新管。
- 7
加入预冷 PBS 稀释至 3 mL 降低体系密度，再次 100,000×g 离心 90 min。
- 8
弃上清，300 μL 无颗粒 PBS 重悬即得高纯度外泌体。
关键参数速查
| 蔗糖垫浓度 | 30%（w/v），重水配制 |
| 垫层体积 | 250 μL |
| 两次超离 | 均 100,000×g × 90 min |
| 纯度提升 | 显著降低游离蛋白共沉淀 |
⚠️ 常见坑与避坑指南
- 滴加样本时贴壁缓流，界面被搅浑则纯化效果大打折扣
- 必须用 D₂O 配制才能精确调节液垫密度
- 吸取底部组分时动作要慢，避免吸到上层杂质
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本项目服务：超速离心（蔗糖垫）含税参考价：300 元/50mL周期：3 个工作日
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