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透射电镜（TEM）负染形态观察
Transmission Electron Microscopy
🔬 表征鉴定 板块|演示环境 · 内容持续校订中
一句话总结：外泌体鉴定的「眼睛」：负染后观察典型杯托状形态，是论文表征部分的必备图版。
原理
醋酸双氧铀负染液填充囊泡周围背景而无法穿透囊泡本身，电镜成像时囊泡呈亮色、背景呈暗色，形成特征性的「杯状/茶盘状」形貌——直观确认囊泡的存在与完整性。
材料与试剂
- 碳膜铜网 200 目（中镜科仪 BZ11022a）
- 2% 醋酸双氧铀负染液
- 无尘滤纸
- 透射电镜（Hitachi HT-7700，80 kV）
详细步骤（可照做）
共 6 步 · 参数以标准样本量为准，请按实际情况等比调整
- 1
样本冰上缓融，轻柔混匀。
- 2
吸取 10 μL 滴于铜网碳膜面，室温吸附 1 min。
- 3
滤纸从铜网边缘吸去多余液体（切勿触碰膜面）。
- 4
立即滴加 10 μL 2% 醋酸双氧铀负染 1 min，再次从边缘吸干。
- 5
室温自然干燥。
- 6
80 kV 加速电压下观测，寻找背景干净区域采集多倍率图像。
关键参数速查
| 染色液 | 2% 醋酸双氧铀 |
| 加速电压 | 80 kV |
| 交付图版惯例 | 1μm/500nm/200nm 各 1 张 + 100nm 3 张 |
| 判定标准 | 典型杯托状、膜完整、直径 30–200 nm |
⚠️ 常见坑与避坑指南
- 染液现配现用，久置产生沉淀会在网上形成假象颗粒
- 样本浓度过高会导致囊泡重叠难辨——适当稀释
- 滤纸吸液时角度要轻，戳破碳网则整张作废
- 仅凭 TEM 不能「证明」外泌体——需与 NTA/WB 组成证据链（MISEV 要求）
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本项目服务：电镜检测（TEM）含税参考价：200 元/样周期：3 个工作日
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