外泌体中含有丰富的蛋白质，这些蛋白质可以提供有关外泌体的信息，如来源、功能和表征等。常见的外泌体蛋白检测方法包括蛋白免疫印迹（Western blot）、酶联免疫吸附检测（ELISA）、质谱检测（LC-MS/MS）、纳米流式检测（NanoFCM）等，根据国际细胞外囊泡协会发表的《MISEV 2018》指南建议，外泌体蛋白检测最好包含跨膜蛋白、胞质蛋白、阴性蛋白（三阳一阴）的组合，实际检测可根据样品量、物种抗体、仪器限制等实际情况进行最优选择。

1.  蛋白免疫印迹（Western blot）

       Western blot是通过抗原抗体特异性结合的原理，对外泌体标志蛋白进行检测，从蛋白质层面对外泌体进行鉴定。本公司统计了文献内最常用的抗体指标，默认提供5个阳性指标（CD9、CD63、CD81、TSG101、Syntenin）和1个阴性指标（Calnexin）抗体可供客户选择。由于外泌体存在免疫分型，可能导致检测某些阳性指标时实际蛋白表达量低于Western blot的灵敏度检测下限而无法呈现阳性条带，一方面公司会默认设置增加阳性对照来验证实验操作和抗体结合无误，另一方面建议客户考虑调整使用纳米流式检测仪（Flow NanoAnalyzer）、全自动蛋白定量系统（WES）等灵敏度更高的方法来提高检出率。

2.  纳米流式检测（NanoFCM）

       外泌体表面保留有较完整的抗原，可使用荧光直标的特异性单克隆抗体孵育外泌体，再用纳米流式检测仪进行检测，根据所测定的阳性颗粒占比即可知其表面蛋白表达的情况，从而实现外泌体表面蛋白检测。外泌体常见的特异性标记蛋白为CD9、CD63和CD81，使用荧光直标的抗体与外泌体共孵育后进行超速离心清洗多余的游离抗体即可进行纳米流式检测仪的测定。（特别提醒：默认提供3个抗体指标可检测人源和鼠源蛋白，其他物种或其他表面标志蛋白需客户提供直标抗体）

3.  全自动蛋白定量系统（WES）

       Wes系统采用革新的Simple Western技术，颠覆30多年传统的Western Blot方法，实现在同一根样品管中完成样品分离、捕获、固定，免疫检测和定量分析其优点在于，不用制胶和跑胶，不用转膜，减少实验步骤，避免样品损失；自动进行一抗二抗孵育和化学发光检测，自动进行结果分析，有效提高检测结果的精确性和重复性；单个样品上样体积3-5ul，节约珍贵样品和抗体；一次运行时间3个小时，快速高效，检测灵敏度高，低至pg级；实验完成后自动给出详尽的分析数据，包括目的蛋白大小、信噪比、峰面积和含量；可对结果自动进行精确的定量分析。