分离纯化

作者:lifeint   添加时间:2022-11-23 14:38:33

服务项目


服务序号

服务内容

服务说明

收费标准

服务周期

1

超速离心(经典流程)

采用经典超速离心的方法对样本进行外泌体的分离

200元/50ml

3个工作日

2

超速离心(蔗糖垫)

采用蔗糖垫超速离心的方法对样本进行外泌体的分离

300元/50ml

3个工作日

3

超速离心(碘克沙醇密度梯度)

采用碘克沙醇密度梯度超速离心的方法对样本进行外泌体的分离

500元/50ml

3个工作日

4

聚合物沉淀(PEG)

采用聚合物沉淀(PEG)的方法对样本进行外泌体的分离

200元/50ml

3个工作日

5

超声纳滤(EXODUS)

采用超声纳滤芯片的方法对样本进行外泌体的分离

600元/500ul

5个工作日

6

磁珠捕获(膜感应肽)

采用MSP膜感应肽偶联磁珠捕获的方法对样本进行外泌体的分离

200元/样

3个工作日

7

大体积样本分离

(陶瓷膜+切向流+SEC柱)

采用陶瓷膜系统对上清进行除杂处理,后通过切向流浓缩的方法进行浓缩,再通过尺寸排阻色谱柱进行纯化,最后通过离心沉淀回收外泌体

1500元/L

10个工作日


实验介绍

        

       外泌体及细胞外囊泡(EV)的分离方法包括超速离心(UC)、聚合物沉淀、切向流过滤(TFF)、超滤(UF)、尺寸排阻色谱(SEC)与亲和捕获。应结合样本类型、体积、目标组分及下游实验,选择分离或组合纯化流程,并评估回收率、纯度与成本。

       当前实验室配置有超速离心机、自动化外泌体提纯系统、切向流超滤系统、尺寸排阻色谱柱纯化系统等设备来实现外泌体的分离纯化,单批次可处理从100微升-100L的上清液,并可完成下游的鉴定分析、纯度和污染质控以及冷冻干燥等加工工艺。

外泌体分离纯化示意图

1.  超速离心(UC)

       差速超速离心通过逐步离心去除细胞、碎片及较大颗粒,再富集 EV,并按实验需要进行洗涤。蔗糖垫或碘克沙醇密度梯度可增加分离步骤,减少部分共分离成分。最终纯度和回收率取决于样本及操作条件,需要通过表征和污染质控确认。

外泌体分离纯化示意图

2.  切向流浓缩(TFF)+尺寸排阻色谱柱(SEC)

       切向流过滤(TFF)使液流平行于膜表面,可用于 EV 的浓缩与缓冲液置换。尺寸排阻色谱(SEC)利用颗粒进入多孔填料的程度差异分离:较大的 EV 通常较早洗脱,较小的游离蛋白等组分较晚洗脱。TFF 与 SEC 可组合用于较大体积样本,但回收率、纯度、处理时间及成本仍需结合具体样本验证,不能笼统认定在所有指标上优于超速离心。

外泌体分离纯化示意图

3.  全自动外泌体提纯系统(EXODUS)

       EXODUS 自动化分离系统结合负压振荡与双耦合谐波振荡驱动膜振动,通过纳米孔膜富集 EV、去除部分可透过膜的组分。该技术已有 Nature Methods 原始研究报道;具体样本的回收率、完整性和残留污染仍需实测。

外泌体分离纯化示意图

外泌体分离纯化示意图

4.  全自动外泌体膜感应肽磁珠捕获系统(EXO-Smart)

       膜感应肽可利用膜曲率、脂质组成及脂质堆积缺陷等特征与 EV 膜相互作用。将所选多肽偶联磁珠后,可配合自动化提取设备完成捕获和洗脱。捕获的 EV 亚群及效率取决于多肽设计和样本条件,应通过对照实验与表征评估,不将某一粒径范围或纯度、产量优势作为所有样本的固定保证。

外泌体分离纯化示意图



MISEV2023 · EXODUS · Nature Methods · Membrane-sensing peptides

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