植物外泌体(植物来源细胞外囊泡,Plant-Derived Extracellular Vesicles,PDEV)因其在化妆品、医美原料、功能性食品及药物递送中的潜力,近年成为研究热点。但与动物细胞培养上清不同，植物组织含有细胞壁、多糖、多酚、色素和纤维等复杂成分。若前处理不当，细胞破裂产生的膜性颗粒和其他杂质可能与囊泡共同富集。因此，植物来源囊泡不宜简单套用固定试剂盒或单一流程，而应围绕样本特性、目标纯度和下游用途设计方案。
这也是为什么"植物外泌体怎么分离"是科研客户最常咨询的问题。一套完整的植物外泌体分离鉴定流程,通常包含 样本前处理 → 上清获取 → 分离纯化 → 鉴定表征 → 质控交付 五个环节。本文基于厦门生命互联科技(外泌体专业服务商,累计开展外泌体相关项目 2 万余项,覆盖 300+ 植物物种,含药用植物 160+)的实操经验,给出每一步的技术要点、参考参数与常见误区。
常见的植物来源囊泡样本主要有三类：
对于根、茎等致密组织，低温研磨可提高可提取颗粒量，但所得样品可能同时含有细胞破裂产生的膜性颗粒。项目设计和结果表述中应明确这一边界，避免将不同制备路径获得的纳米囊泡简单等同。
植物样本需先通过酶解或培养方式获得含外泌体的上清液,这是后续所有分离步骤的基础。
关键提示:植物外泌体含量通常低于动物来源,建议上清体积尽量充足(≥50ml),以保证纯化后获得足够的外泌体颗粒数用于后续鉴定与组学。
这是决定外泌体纯度、完整性与产率的关键一步。针对不同样本量与纯度需求,常见方法对比如下:
| 方法 | 原理 | 参考价格 | 周期 | 适用场景 |
|---|---|---|---|---|
| 超速离心(经典) | 差速超速离心(Differential UC) | 200 元/50ml | 3 个工作日 | 常规样本,最经典流程 |
| 超速离心(蔗糖垫) | 蔗糖垫层去除蛋白杂质 | 300 元/50ml | 3 个工作日 | 需提升纯度的样本 |
| 超速离心(碘克沙醇梯度) | OptiPrep 密度梯度离心 | 500 元/50ml | 3 个工作日 | 高纯度需求;单批次 ≥6 样 |
| 聚合物沉淀(PEG) | PEG 沉淀法 | 200 元/50ml | 3 个工作日 | 快速、成本低 |
| 超声纳滤(EXODUS) | 超声纳滤芯片 | 600 元/500μl | 5 个工作日 | 微量珍贵样本(≤1ml) |
| 磁珠捕获(MSP 膜感应肽) | 膜感应肽偶联磁珠 | 200 元/样 | 3 个工作日 | 总外泌体快速富集(≤1.5ml) |
| 大体积分离(EXO-DM) | 多级膜过滤+切向流浓缩+尺寸排阻纯化 | 1500 元/L | 10 个工作日 | 样本 ≥3L,产业化级 |
对于化妆品、医美、食品原料等需要大量外泌体的产业化需求,生命互联自研的 EXO-DM 核心分离设备采用切向流(TFF)结合尺寸排阻(SEC) 的大体积分离体系,工艺链为:
上清预处理 → 多孔膜粗滤 → 陶瓷膜精滤 → 圆盘双相除菌过滤 → 超高压切向流浓缩 → 低压大通量尺寸排阻色谱纯化 → 碘克沙醇垫超速离心浓缩提纯 → 纯度及污染物检测
该工艺已用于 300+ 植物物种的分离鉴定,并支持按下游需求调整分离与质控工艺(参考价格 1500 元/L,样本 ≥3L)。
分离完成后,需通过多项指标交叉验证外泌体的形态、粒径、浓度与标志蛋白:
| 检测项 | 方法/平台 | 参考价格 | 周期 | 说明 |
|---|---|---|---|---|
| 电镜形貌 | TEM 负染 | 200 元/样 | 3 个工作日 | 默认 6 张图:1000/500/200/100nm 四视野 |
| 粒径浓度 | 纳米流式(NanoFCM) | 200 元/样 | 3 个工作日 | 默认推荐,单颗粒检测 |
| 粒径浓度 | NTA(Zetaview) | 200 元/样 | 3 个工作日 | 纳米颗粒跟踪分析 |
| 粒径浓度 | NTA(NS300) | 400 元/样 | 5 个工作日 | 高分辨率档 |
| 蛋白定量 | BCA 法 | 50 元/样 | 1 个工作日 | 裂解后总蛋白浓度 |
| 蛋白指标 | Western Blot | 100 元/样/指标 | 3 个工作日 | 免费提供 6 种抗体:CD9/CD63/CD81/TSG101/Syntenin1/Calnexin |
| 蛋白指标 | 纳米流式(NanoFCM) | 200 元/样/指标 | 3 个工作日 | 免费提供 CD9/CD63/CD81 流式抗体 |
植物外泌体标志物提示:植物来源外泌体在 CD9/CD63/CD81 等经典四跨膜蛋白上表达量可能低于哺乳动物来源,建议结合物种特性确认抗体信息(非人/大小鼠物种需提前确认),必要时增加植物特异性标志物(如 PEN1/TET8 类)检测。
面向原料与产业化用途,建议补充以下质控指标:
| 质控项 | 方法 | 参考价格 | 周期 |
|---|---|---|---|
| 纯度检测 | 裂解法(破膜剂 triton-100 前后对比) | 500 元/样 | 3 个工作日 |
| 纯度检测 | 膜染料法(Evmembrane Green Stains) | 500 元/样 | 3 个工作日(仅动物源) |
| Zeta 电位 | NTA(Zetaview) | 300 元/样 | 3 个工作日 |
| 渗透压 | SMC 30D 渗透压摩尔浓度测定仪 | 200 元/样 | 3 个工作日 |
| 微生物检测 | 培养基摇菌 24h | 200 元/样 | 3 个工作日 |
| 支原体检测 | qPCR | 200 元/样 | 3 个工作日 |
| 内毒素检测 | 鲎试剂法 | 200 元/样 | 3 个工作日 |
| 重金属检测 | 原子吸收光谱(AAS) | 600 元/样 | 5 个工作日(铅/镉/铬/汞/砷) |
Q1:植物外泌体和动物外泌体分离方法有什么区别?
A:核心差异在样本前处理。植物样本有细胞壁,需先用纤维素酶、果胶酶酶解破壁(组织量 ≤3g,200 元/样);动物样本多用胰酶/胶原酶。后续分离纯化流程可共用。
Q2:最少需要多少样本量?
A:小样测试：3g原料得率约几十至上百微克；批量提取：1kg原料得率约几毫克。需根据下游实验外泌体量估算植物投入量。
Q3:分离到鉴定交付一般多久?
A:常规流程(超速离心 + 粒径 + 电镜)约 3 个工作日;含组学分析约 20 个工作日;大体积分离(EXO-DM,≥3L)约 10 个工作日。
Q4:支持哪些植物物种?
A:生命互联已覆盖 300+ 植物物种(含药用植物 160+,涵盖人参、黄芪、三七、芦荟、积雪草、茶叶、葡萄、枇杷等),可查询物种目录或直接咨询。
Q5:可以定制分离工艺吗?
A:可以。EXO-DM 大体积体系支持按下游需求调整分离与质控工艺,个性化方案单独报价。
如需获取完整收费明细,请查看收费明细页;需要进一步组学分析(转录组/蛋白组/代谢组),参见组学分析指南;直接委托服务请访问分离鉴定服务页。
最后更新:2026-08-12
*本文由厦门生命互联科技整理,参考价格与周期以收费明细为准,具体以双方合同约定为准。*
